Опыт тестирования крови доноров

Опыт использования различных методов иммуногематологического тестирования крови доноров и реципиентов в условиях многопрофильного стационара

В.В. Данилец1, И.Я. Голоусиков1, О.Г. Панасенкова1, И.Н. Лысенко1, Н.Г. Дашкова2

1 ГБУЗ «Городская больница № 3 ДЗМ», г. Москва

2 ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет
имени И.М. Сеченова» Минздрава России, г. Москва

Резюме

Иммуногематологические исследования образцов крови доноров и реципиентов в условиях многопрофильного стационара целесообразно проводить с использованием высокочувствительных и высокоспецифичных иммуногематологических методов, что обеспечит высокий уровень имму-ногематологической безопасности гемокомпонентной терапии и позволит минимизировать риск посттрансфузионных реакций. Представлены данные сравнительного тестирования 20 326 образцов крови доноров и реципиентов различными методами иммуногематологического обследования: гемагглю-тинация на микропланшетах, твердофазная технология и гелевая технология с использованием карт различных производителей. При использовании твердофазной технологии «Capture-R» чаще выявлялся антиген А2 в группе наблюдения AB(IV), а также Dw в группе наблюдения Rh - как у доноров, так и у реципиентов.

Ключевые слова: группы крови системы АВО, резус-фенотип, донор, реципиент.

Введение

Проблеме оптимизации и улучшения качества иммуногематологического тестирования больных перед трансфузией донорских гемокомпонентов в отечественном здравоохранении уделяется повышенное внимание. Принятый в апреле 2013 года приказ Минздрава России № 183н «Об утверждении Правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов» [1] внес существенные дополнения в алгоритм предтрансфузионного тестирования, регламентируя подбор идентичных эритроцитов донора и реципиента по 10 антигенам. В обязательном порядке регламентируется также скрининг аллоиммунных антител у реципиентов с использованием панели стандартных эритроцитов. Новые правила, расширяя спектр и увеличивая количество исследований, диктуют необходимость сравнения различных технологий и выбора наиболее чувствительных, информативных, экономически доступных методов иммуногематологического тестирования. В частности, представляет интерес сравнение использования твердофазной и гелевой технологий. Единичные исследования, посвященные сопоставлениям различных технологий тестирования, проводились в США [2]. Сведения о подобного рода исследованиях в отечественной литературе отсутствуют.

Цель настоящей работы - оценить диагностическую значимость технологии гемагглютинации в микропланшетах и твердофазной технологии «Capture» компании Immucor (США) и сравнить с двумя гелевыми технологиями - Bio-Rad (США) и Grifols (Испания).

Материалы и методы

За период с января по декабрь 2013 года на анализаторе «Galileo Neo» Immucor (США) были проведены иммуногематологические исследования 20 326 образцов крови. Параллельно гелевыми методами Bio-Rad (США) и Grifols (Испания) протестировано 7073 образца крови доноров реципиентов, беременных женщин и рожениц. Исследования проводили в 2 этапа. Первый этап включал определение групп крови по системе АВО с идентификацией подгрупп (А2, В2), резус-принадлежности, выявление слабого варианта антигена D - Dw и экстраагглютининов анти-А1 Второй этап заключался в проведении скрининга антиэритроцитарных аллоантител различными методами и установлении их специфичности. При работе методами Immucor (США) использовался полностью автоматический анализатор «Galileo Neo», моноклональные сыворотки двух разных марок- «ImmuClone» и «NOVACLONE» для определения антигенов системы АВО, Rh, Kell, микропланшеты «Capture-R» для выявления антиэритроцитарных антител, определения титра, стандартные эритроциты «Referencells A (1), В» и другие материалы, предусмотренные технологией, в том числе контрольные.

Результаты

Результаты параллельного тестирования образцов крови по системе АВО и резус с использованием твердофазной и гелевой технологий приведены в табл.1.

Как показали исследования, частота выявления антигена А2 и антигена В2 в группах наблюдений А (II) и В (III) при использовании всех трех методов существенно не различалась. Выявление антигена А2 в группе наблюдения АВ (IV) при использовании твердофазного метода было чаще, чем с использованием гелевой технологии (χ2 = 4,46, р < 0,05). В группе наблюдения Rh - антиген Dw при использовании гелевой технологии выявлялся в 0,9-1,6%, а с использованием анализатора «Galileo Neo» Immucor - в 2,2% (χ2 = 5,8, χ2= 6,1, р

Группа крови

В том числе, подгруппа

Выявлено

С использованием гелевых карт Bio-Rad

С использованием гелевых карт Grifols

С использованием анализатора «Galileo Neo» Immucor

абс.

%

абс.

%

абс. / из них доноров

%

А (II)

n = 2631

А2 (II)

56

2,1

68

2,6

73

2,8

В (III)

n = 1400

В2 (III)

0

0

1

0,07

2/1

0,14

АВ (IV)

n = 503

А2Вα (IV)

1

0,2

0

0

7/3

1,4

Rh-

n = 1202

DW

11

0,9

19

1,6

26/3

2,2

Частота выявления слабых вариантов антигенов А и В с идентификацией подгрупп

Выявление и подтверждение слабого варианта антигена D особенно важно при исследовании образцов крови доноров. Следует напомнить, что при определении резус-принадлежности у доноров и выявлении слабых вариантов антигена D донорские эритроциты относят к резус-положительным, что позволяет избежать сенсибилизации при переливании таких эритроцитсодержащих сред резус-отрицательным реципиентам [3, 4, 5, 6, 7]. Обращает на себя внимание тот факт, что при использовании твердофазной технологии в образцах крови с подгруппой А2В (IV) в 7 случаях, в том числе у 3 доноров, выявлены экстраагглютинины анти-А,, тогда как с помощью технологии Bio-Rad экстраагглютинины обнаружены только в одном образце, а с использованием Grifols не выявлены ни в одном образце.

Результаты скрининга антител при параллельном тестировании образцов крови тремя методами приведены в табл. 2.

Как следует из табл. 2, антиэритроцитарные аллоантитела были выявлены у 0,6-0,9% обследованных лиц. Фенотипирование антигенов эритроцитов и выявление аллоиммунных антиэритроцитарных антител - необходимые составляющие для обеспечения иммуногематологической совместимости крови донора и реципиента при гемотрансфузиях [1, 3, 4, 6-8]. Ошибки при проведении исследований антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител могут быть результатом как нарушения технологии, так и применения неадекватных схем диагностики [4, 6, 9].

Неправильное заключение о наличии или отсутствии антигенов и аллоиммунных антител у доноров и реципиентов повышает риск развития посттрансфузионных осложнений гемолитического типа [5, 9]. Выбор высокочувствительных и высокоспецифичных иммуногематологических методов позволит обеспечить высокий уровень иммуногематологической безопасности гемокомпонентной терапии и минимизировать риск посттрансфузионных реакций [7, 10]. 

Технология

Количество обследованных

Выявлено образцов с антителами

абс. число

%

Гелевая Bio-Rad

20 326

123

0,6

Гелевая Grifols

178

0,8

Твердофазная «Capture-R» Immucor

191

0,9

Частота носителей антител при исследовании образцов крови различными методами

Заключение

Современные автоматизированные варианты классических методов им-муногематологического тестирования (гемагглютинация на микропланшетах, твердофазная технология) и гелевые технологии эффективно используются при исследовании крови доноров и различных категорий реципиентов. Полученные результаты показали преимущество технологии Immucor при выявлении экстраагглютининов анти-А1 у доноров и реципиентов подгрупп А2В (IV), а также антигена Dw по сравнению с гелевыми технологиями.

Литература

  1. Приказ Министерства здравоохранения  Российской Федерации от 02.04.2013 г.
    № 183н «Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее
    компонентов». - М., 2013. - 26 с.
  2. Issitt P.D., Anstee D.J. Applied Blood Group Serology. - 4-th ed. - Durham, NC, USA:
    Montgomery Sc. Publ., 1998. - 1208 p.
  3. Иммуносерология (нормативные документы) / Составит. А.Г. Башлай, СИ. Донсков. -
    М.: ВНИИТИ, 1998.-196 с.
  4. Донсков СИ., Морозов В.А. Группы крови человека: Руководство по иммуносерологии.-М.: ИП Скороходов В.А., 2011. - 1016 с.
  5. Косяков П.Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии. - М.: Медицина, 1974.-360 с.
  6. Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. - М.: Медицинское
    информационное агентство, 2004. - С. 279-283.
  7. Скудицкий А.ЕПрофилактика посттрансфузионных осложнений, обусловленных
    групповыми антигенами эритроцитов: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2001. - 26 с. 

  8. Weisbach V., Kohnhauser Т., Zimmerman R. et al. Comparison of the performance of microtube column systems and solid-phase systems and the tube low-ionic-strength solution additive indirect antiglobulin test in the detection of red cell alloantibodies // Transfus. med. - 2006. - Vol. 16,№ 4. - P. 276-284.

  9. Минеева Н.В. Антитела к антигенам эритроцитов и методы их выявления: Методические рекомендации. - СПб., 2000. - 14 с.

  10. Умнова М.А. Изосерологические системы крови человека и их значение в трансфузиологии // Групповые системы крови и гемотрансфузионные осложнения / Подред. проф.
    М.А. Умновой. - М.: Медицина, 1989. - С. 5-30.

Experience in using different methods of immunohaematological blood testing of donors and recipients in a general hospital

V.V. Danilets1,1.J. Golousikov1, O.G. Panasenkova1,1.N. Lysenko1, N.G. Dashkova2

1 «City Hospital № 3 of Moscow Healthcare Department», Moscow 71.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow

Immunohematology testing of samples of donors and recepients are to be done using methods with high specificity and high sensitivity, this will provide high level of immunohematology safety of blood components therapy and minimize risk of posttransfu-s'ion reactions. Results of investigation of different immunohematology methods based on testing of 20 326 samples of donors and recipients are submitted. Comparison of hemagglutination method on microplates and solid phase technology «Capture-R» Im-mucor (США) with gel technologies of different manufacturers. Investigation identified certain benefit of solid phase technology «Capture-R» on determination of weak antigen Rhesus - D", as well as extraagglutinins anti A, on patients having A2B blood groups.

Key words: ABO blood groups, Rhesus-phenotype, donor, recipient.